液相(xiang)色譜儀是(shi)藥物(wu)分析工作者(zhe)最(zui)常(chang)用的“一門武器”。從業者(zhe)深感何時能將(jiang)液相(xiang)做(zuo)到(dao)有“打dota”感覺時，便是(shi)到(dao)了游刃有余、駕輕(qing)就熟的境界。現今的液相(xiang)軟件均已具備了強大的數據處理(li)功(gong)(gong)能，如(ru)能庖丁解(jie)牛般使用，便可將(jiang)此測定做(zuo)到(dao)事半功(gong)(gong)倍(bei)、輕(qing)松自(zi)如(ru)。

　　一、 水相(xiang)中(zhong)的溶(rong)質溶(rong)解(jie)方式

　　水相中需溶(rong)解(jie)的無機鹽和表面活性(xing)劑(ji)等(deng)固體(ti)溶(rong)質，強烈建(jian)議采用(yong)加熱(re)法，不建(jian)議采用(yong)振(zhen)搖、超聲等(deng)方(fang)(fang)式(shi)。因此種方(fang)(fang)式(shi)的溶(rong)解(jie)，溶(rong)質可能處于“臨界膠團濃度”，其后一旦遇(yu)(yu)到某特殊(shu)情形(如遇(yu)(yu)有機溶(rong)劑(ji)、溫度劇降等(deng))，極易析(xi)出(chu)少量結晶(jing);而一旦析(xi)出(chu)，便(bian)將損傷儀器和色譜柱，呈現(xian)(xian)泵頭處析(xi)出(chu)“鹽和白粉”的現(xian)(xian)象。

　　二、 流動(dong)相的配制與(yu)使(shi)用(yong)

　　1. 恒度洗脫

　　一(yi)(yi)定是將(jiang)水相(xiang)(xiang)與有(you)(you)機相(xiang)(xiang)混合后、抽濾(lv)(使用(yong)混合型(xing)過(guo)濾(lv)膜)，用(yong)一(yi)(yi)個管(guan)路(如A管(guan))泵入儀器，這是使用(yong)的(de)一(yi)(yi)個原(yuan)則(ze)性問題!切勿因節(jie)約(yue)有(you)(you)機相(xiang)(xiang)、便于摸索色譜(pu)條件等原(yuan)因而(er)使用(yong)兩個管(guan)路(一(yi)(yi)個純(chun)水相(xiang)(xiang)、一(yi)(yi)個純(chun)有(you)(you)機相(xiang)(xiang))抽入儀器，即便配制了脫(tuo)氣機。因此(ci)種情形極易造(zao)成水相(xiang)(xiang)中的(de)鹽和表面活性劑少量析出。

　　剩余流(liu)動相完全可繼續使(shi)用(yong)，密封后放(fang)置(zhi)陰(yin)涼(liang)處;待下次試驗時與新配制的流(liu)動相混合后抽(chou)濾(lv)即可。無需擔心(xin)發霉、無機鹽析出、揮發、比例(li)不準等(deng)問(wen)題，這些皆(jie)為疑(yi)(yi)神疑(yi)(yi)鬼(gui)。實(shi)(shi)踐是檢驗真(zhen)理的唯一標準!實(shi)(shi)踐吧~

　　2. 梯度洗脫

　　流動相(xiang)配制(zhi)最(zui)為(wei)科(ke)學的方式是：A相(xiang)為(wei)高(gao)比例的水相(xiang)-低比例的有(you)(you)機(ji)相(xiang)、B相(xiang)為(wei)低比例的水相(xiang)-高(gao)比例的有(you)(you)機(ji)相(xiang)(英國藥典幾乎均如此(ci));其次為(wei)：A相(xiang)為(wei)高(gao)比例的水相(xiang)-低比例的有(you)(you)機(ji)相(xiang)、B相(xiang)為(wei)純有(you)(you)機(ji)相(xiang);最(zui)不科(ke)學的為(wei)：A相(xiang)為(wei)純水相(xiang)、B相(xiang)為(wei)純有(you)(you)機(ji)相(xiang)，如既有(you)(you)質(zhi)量(liang)標準采(cai)用了此(ci)種(zhong)方式，強烈建議改(gai)為(wei)第二種(zhong)或第一種(zhong)方式，否則(ze)基線漂移嚴(yan)重，難(nan)以進行穩定的雜質(zhi)檢測。

　　梯(ti)度洗脫結束后，強烈建議經5分鐘(zhong)回到(dao)初(chu)始(shi)(shi)狀(zhuang)態(tai)(tai)，再平衡5分鐘(zhong)后開始(shi)(shi)下(xia)一針測定(ding)。這(zhe)10分鐘(zhong)的穩(wen)定(ding)極為關鍵。切勿(wu)短時間內(nei)回到(dao)初(chu)始(shi)(shi)狀(zhuang)態(tai)(tai)，此舉(ju)對儀(yi)器(qi)損傷較大。

　　三、 色譜(pu)柱的安裝

　　標準SOP應為：取A管路放(fang)入流動(dong)相瓶(ping)中(zhong)→擰(ning)松泵(beng)頭(tou)(tou)→流速由0ml/min逐(zhu)級(ji)升(sheng)至10ml/min，觀察尾液是否(fou)呈(cheng)瀑布狀(zhuang)流出(chu)，持(chi)(chi)續(xu)10秒→擰(ning)緊泵(beng)頭(tou)(tou)→流動(dong)相呈(cheng)拋射狀(zhuang)從安(an)裝色(se)譜柱的一(yi)(yi)端噴(pen)出(chu)，觀測是否(fou)呈(cheng)拋物線狀(zhuang)，持(chi)(chi)續(xu)5秒→流速逐(zhu)級(ji)降(jiang)至1.0ml/min →安(an)裝色(se)譜柱，待20秒后，流動(dong)相從色(se)譜柱另(ling)一(yi)(yi)端呈(cheng)泉水狀(zhuang)涌出(chu)，安(an)裝另(ling)一(yi)(yi)頭(tou)(tou)→手握兩端，擰(ning)緊。

　　以上安裝(zhuang)順序遵(zun)循的(de)(de)是：逐(zhu)級排放氣(qi)泡和儀器(qi)內存留的(de)(de)洗(xi)液，使(shi)得安裝(zhuang)后(hou)氣(qi)泡極難混入。本人曾試驗梯(ti)度洗(xi)脫(tuo)連(lian)續一(yi)周，第一(yi)針(zhen)(zhen)與最(zui)后(hou)一(yi)針(zhen)(zhen)主成分保留時間(jian)相差在6秒以內。

　　四、 試(shi)驗(yan)后(hou)色譜(pu)柱的清洗(xi)

　　1. 最為常用的C8柱、C18柱

　　1.1 流動相僅為(wei)乙腈(jing)-水或甲(jia)醇(chun)-水時

　　繼續沖(chong)洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗時溫度，即(ji)可(ke)。

　　1.2 水相中有無機鹽、表面(mian)活(huo)性(xing)劑或三乙胺(an)、高(gao)氯酸等物質時

　　先采(cai)用純水(或含有(you)2%甲醇(chun))，沖(chong)(chong)洗(xi)A管路(試驗(yan)采(cai)用哪個管路，就要從頭到尾(wei)沖(chong)(chong)洗(xi)該管路)，時間(jian)30分鐘(如流動相中有(you)表(biao)面活性劑，適當增加時間(jian))，流速1.0ml/min，柱溫(wen)可較試驗(yan)溫(wen)度高出(chu)5~10℃;隨后更換成20%甲醇(chun)再(zai)沖(chong)(chong)洗(xi)30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫(wen)箱加熱裝置關閉。結(jie)束(shu)后取(qu)下(xia)色譜柱放(fang)置陰涼處(chu)。

　　很多同仁其后采用(yong)高比例(li)的甲醇(chun)沖洗，實屬畫蛇添足，導(dao)(dao)致(zhi)殘余的有(you)(you)機相中水相遇到(dao)高比例(li)的甲醇(chun)后析出(chu)少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱(zhu)中析出(chu)，也導(dao)(dao)致(zhi)了色譜柱(zhu)壽(shou)命(ming)大為縮短。本人曾(ceng)使用(yong)過一根(gen)約2000元的色譜柱(zhu)，正(zheng)著(zhu)用(yong)了四(si)年、倒著(zhu)用(yong)了兩(liang)年(倒著(zhu)用(yong)測非有(you)(you)關物質)。

　　2. 其他類(lei)型色譜柱

　　查(cha)詢獲取如何科學合理(li)地使用與清洗保(bao)存該類型色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)方(fang)法，切勿(wu)盲動，否則導致色(se)譜(pu)柱(zhu)性能急劇下(xia)降。

　　五、 試驗(yan)順序

　　工作(zuo)流程應如(ru)下進行：

　　(1) 0~2小時 配制流動(dong)相、對(dui)照(zhao)品和供試品溶液等，切勿催促(cu)昨日試驗(yan)同事(shi)。

　　(2) 2~3小(xiao)時(shi)(shi) 采用(yong)A管路(lu)注(zhu)入流動相(B、C、D管路(lu)從(cong)來(lai)不用(yong)，除非梯(ti)度洗脫才用(yong)到B管路(lu))，平衡(heng)1小(xiao)時(shi)(shi)。如流動相中有表面活性劑，建議前(qian)一晚小(xiao)流速(su)過夜，第二天上班(ban)后(hou)將流速(su)增至(zhi)1.0ml/min，平衡(heng)1小(xiao)時(shi)(shi)后(hou)即可開始(shi)做試驗。

　　(3) 3~5小時(shi) 測(ce)定(ding)空白溶劑(ji)，一定(ding)要做到基線不(bu)(bu)漂移后方(fang)可(ke)開始測(ce)定(ding)。所(suo)謂“不(bu)(bu)漂移”，通常系指(zhi)以(yi)1.0%自身對照溶液主成分峰高約(yue)20%高度來設定(ding)的視(shi)野(ye)范圍觀(guan)察所(suo)得，切不(bu)(bu)可(ke)設定(ding)得過小，使得雜質峰顯(xian)得很(hen)突兀、基線抖(dou)動(dong)得很(hen)厲(li)害，弄(nong)得人很(hen)擔心。

　　(4) 5~8小(xiao)時 配制完所有樣品(pin)，預(yu)試(shi)(shi)了(le)對照溶液(ye)和供試(shi)(shi)品(pin)溶液(ye)，設(she)(she)定好自動進樣程序，程序最后一針設(she)(she)定為小(xiao)流速過夜，紫外燈關閉。切(qie)勿設(she)(she)定為切(qie)換成B管路洗脫，此舉得不(bu)償失!

　　(5) 8~24小時(shi) 放心回(hui)家，讓(rang)儀器(qi)自動(dong)進(jin)樣，除非不(bu)(bu)穩定的(de)樣品(配制一份測定一針)。充(chong)分(fen)利(li)用(yong)下班后(hou)的(de)16小時(shi)，做到(dao)從(cong)容不(bu)(bu)迫、鎮定自若(ruo)。如單(dan)位還無自動(dong)進(jin)樣裝置，強烈建議(yi)向領導申請(qing)購買，因一臺(tai)自動(dong)媲美三臺(tai)手(shou)動(dong)。

　　(6) 第二(er)天0~0.5小時(shi) 檢查(cha)并(bing)計算(suan)昨(zuo)晚試驗結果(guo)，如發(fa)現不良記錄，將(jiang)流速增(zeng)至1.0ml/min，平衡30分(fen)鐘后，測定重新配(pei)制的該份(fen)樣品(pin)即可(同時(shi)回(hui)校對照一針)。無(wu)需全部重新測定，不要過(guo)度謹小慎微。

　　(7) 第二天0.5~2.0小(xiao)時 如上沖洗色譜柱(zhu)，交給其后試驗同事。

　　六、 液相軟件的使用

　　現今(jin)幾大主流品牌的硬件(jian)性能(neng)已相差(cha)無幾，主要還(huan)是(shi)軟件(jian)的設(she)計是(shi)否能(neng)使操作者得心應手、隨心所欲。

 　　強烈建議掌(zhang)握各(ge)軟(ruan)件(jian)(jian)的批(pi)處理、編輯樣品處理模板等(deng)功能(neng)，做到一勞永(yong)逸，讓軟(ruan)件(jian)(jian)充分為(wei)工作所用。“磨刀不(bu)誤砍柴工”：本人曾用20分鐘完成500個(ge)溶(rong)(rong)出(chu)度樣品數據處理，做出(chu)溶(rong)(rong)出(chu)曲線圖。體會一下~

　　七、 其他

　　1. 如(ru)(ru)需使用(yong)正相(xiang)系統，一(yi)定要(yao)單獨采(cai)用(yong)一(yi)臺儀器(如(ru)(ru)二(er)手的、較為破舊的、淘汰的等)，切勿(wu)采(cai)用(yong)異丙醇(chun)轉換，此舉(ju)對儀器損(sun)傷極(ji)大(da)，等于“自(zi)殺”!

　　2. 正相所使用(yong)(yong)的流動相(如正己烷、環己烷等)，無需抽濾，混勻超(chao)聲后即可使用(yong)(yong)，“大(da)道(dao)至簡”。

　　3. 柱溫(wen)(wen)箱必須配制。如欲經濟，可購買國產柱溫(wen)(wen)箱。