1.在重蒸酚中(zhong)為什么(me)加(jia)入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?

　　保存在冰箱中的(de)(de)(de)酚，容(rong)易被(bei)空氣氧(yang)化(hua)(hua)而變成粉(fen)紅色(se)，這樣的(de)(de)(de)酚容(rong)易降(jiang)解(jie)DNA，一(yi)般不可(ke)(ke)以使用。為(wei)了防止酚的(de)(de)(de)氧(yang)化(hua)(hua)，可(ke)(ke)加入0.1%的(de)(de)(de)8-羥基喹啉(lin)及(ji)少量巰基乙醇(chun)。8-羥基喹啉(lin)是帶(dai)有(you)淡黃色(se)的(de)(de)(de)固體粉(fen)沫，不僅能(neng)抗氧(yang)化(hua)(hua)，并在一(yi)定程度上(shang)能(neng)抑(yi)制DNase的(de)(de)(de)活性。

　　2.如(ru)何將不同(tong)構型的(de)質粒DNA區別(bie)開(kai)?

　　由于不同(tong)構型的(de)(de)DNA在瓊(qiong)脂糖凝膠電泳(yong)中的(de)(de)遷(qian)移(yi)率不同(tong)，cccDNA的(de)(de)泳(yong)動速度最快，通過(guo)凝膠電泳(yong)方法(fa)可(ke)將不同(tong)構型的(de)(de)DNA區(qu)別(bie)開(kai)。

　　3.用酚-氯仿(fang)(fang)抽提細胞基因組DNA時，通常要在(zai)酚-氯仿(fang)(fang)中加少許異戊醇，為什么?

　　異戊醇可以降(jiang)低表面張力(li)，從(cong)而減少氣泡產生(sheng)。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的(de)上層含DNA的(de)水相、中間的(de)變性(xing)蛋白相及(ji)下層有機(ji)溶(rong)劑(ji)相維持穩定(ding)。

　　4.用乙(yi)醇沉淀(dian)DNA時，為什么加入(ru)單(dan)價的(de)陽(yang)離子(zi)?

　　用乙醇沉淀DNA時，通常(chang)要在溶液中加(jia)入單價的陽離子(zi)，如(ru)NaCl或NaAc，Na+中和(he)DNA分子(zi)上(shang)的負電荷，減(jian)少DNA分子(zi)之間的同(tong)性電荷相斥力，而易于聚集(ji)沉淀。

　　5.在提取RNA時經常(chang)使用異硫氰酸胍(gua)，有什么作用?

　　RNA是一(yi)種(zhong)極易降解的核酸(suan)(suan)分子。高濃(nong)度強變(bian)性劑異硫(liu)氰(qing)酸(suan)(suan)胍使(shi)細胞(bao)結構迅速被(bei)破壞，使(shi)RNA從(cong)細胞(bao)中釋放(fang)出來。同(tong)時高濃(nong)度異硫(liu)氰(qing)酸(suan)(suan)胍還使(shi)細胞(bao)內(nei)的RNA酶失活(huo)，使(shi)釋放(fang)出的RNA不被(bei)降解。

　　6.蛋白印跡中封閉液(ye)的作(zuo)用?

　　封閉(bi)液的(de)(de)(de)作用(yong)是(shi)封閉(bi)未吸附(fu)蛋白的(de)(de)(de)部(bu)位，以減(jian)少非特異性結合背(bei)景的(de)(de)(de)影響。常用(yong)的(de)(de)(de)封閉(bi)液有脫脂奶粉(fen)、小(xiao)牛血清等(deng)。

　　7.DNA通常保(bao)存在(zai)什么緩(huan)沖(chong)液中(zhong)?

　　采用TE緩(huan)沖(chong)液，Tris-HCl的(de)緩(huan)沖(chong)系(xi)統(tong)，加入EDTA可(ke)以螯合二(er)價(jia)金屬(shu)離子(zi)(zi)進而抑制依賴于二(er)價(jia)金屬(shu)離子(zi)(zi)的(de)DNA酶的(de)活(huo)性，對DNA起到保護作(zuo)用。

　　8.在(zai)酶切(qie)反應緩沖液中為(wei)什么加入BSA?

　　通過提(ti)高溶液中蛋白質的濃(nong)度，對酶(mei)起保護作(zuo)用(yong)。

　　9.簡單的(de)克隆載體必需(xu)包括什么(me)?

　　復制(zhi)起點;選(xuan)擇標(biao)記：主(zhu)要是抗性(xing)基因;多(duo)克隆位(wei)點：便于外源DNA的插(cha)入(ru)。

 　　10.用(yong)(yong)酚抽提(ti)細胞DNA時，有什么作用(yong)(yong)?

　　使蛋白質(zhi)變性。

　　11.在分離DNA時(shi)，要(yao)使用EDTA，為(wei)什么?

　　EDTA是金屬離子(zi)螯(ao)合劑(ji)，螯(ao)合二(er)價離子(zi)，抑(yi)制核酸(suan)酶的活性。

　　12.在分離DNA過程中，造(zao)成(cheng)DNA分子斷裂的因素有哪(na)些?

　　核(he)酸酶降解(jie);化學降解(jie);物理剪切。

　　13.使用離心機(ji)應注意什么?

　　首先(xian)應該根據(ju)自己的實(shi)驗需(xu)求選擇合(he)適的離(li)心(xin)(xin)(xin)機(ji)和轉(zhuan)(zhuan)子(zi)以及離(li)心(xin)(xin)(xin)管，使用離(li)心(xin)(xin)(xin)機(ji)時(shi)的工作轉(zhuan)(zhuan)速不應該超(chao)過(guo)離(li)心(xin)(xin)(xin)機(ji)、轉(zhuan)(zhuan)子(zi)以及離(li)心(xin)(xin)(xin)管的最(zui)大允許轉(zhuan)(zhuan)速。離(li)心(xin)(xin)(xin)前注意嚴格平衡樣品(pin)。安(an)裝轉(zhuan)(zhuan)子(zi)和轉(zhuan)(zhuan)子(zi)蓋(gai)要規范、準確(que)。離(li)心(xin)(xin)(xin)時(shi)要留人看守(shou)，發現離(li)心(xin)(xin)(xin)機(ji)異常應立即(ji)關(guan)閉離(li)心(xin)(xin)(xin)機(ji)。離(li)心(xin)(xin)(xin)結束后要安(an)放(fang)好轉(zhuan)(zhuan)子(zi)。

　　14.分(fen)子生(sheng)物學實(shi)驗室(shi)常用(yong)的滅菌方法有哪些?

　　高(gao)壓蒸汽滅(mie)(mie)菌、干熱滅(mie)(mie)菌、化學藥劑消毒、過(guo)濾除菌。

　　15.使(shi)用移液器有哪些注意(yi)事項?

　　垂直吸(xi)液、慢(man)吸(xi)慢(man)放;選擇合適的(de)(de)量程范圍(wei)，不能超過量程使用(yong);選擇與移液器(qi)匹配的(de)(de)槍(qiang)頭，安裝槍(qiang)頭時不要用(yong)力太猛;移液器(qi)每日(ri)用(yong)完(wan)后，應旋到最大(da)刻度。